项目介绍

细胞周期检测是用于分析细胞在不同细胞周期阶段（如G1期、S期、G2期和M期）的分布情况的一种实验方法。这种检测对于了解细胞的增殖状态、调控机制以及在某些疾病（如癌症）中的作用至关重要，有助于理解细胞增殖调控、药物作用机制以及疾病进展。

流式细胞术（Flow Cytometry）

1. 实验原理

流式细胞术通过检测细胞DNA含量来区分细胞周期中的不同阶段。细胞在G1期和G2期具有二倍体DNA含量，而在S期DNA含量逐渐增加，M期时DNA含量暂时加倍。

2. 实验步骤

①细胞固定：

将细胞用70%乙醇在-20°C固定过夜；

②RNA酶处理：

用RNA酶处理细胞，以去除RNA对DNA染色的干扰；

③DNA染色：

使用碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）或其他DNA特异性染料进行染色；

④流式细胞仪分析：

将染色后的细胞通过流式细胞仪进行分析，收集荧光信号；

⑤数据分析：

使用专门的软件根据DNA含量分布区分G1、S和G2/M期的细胞，并计算各期细胞的比例。

BrdU标记法

1. 实验原理

5-溴脱氧尿嘧啶（Bromodeoxyuridine, BrdU）是一种胸腺嘧啶类似物，可以替代胸腺嘧啶在S期整合到新合成的DNA中。通过检测BrdU的掺入，可以确定细胞是否处于S期。

2. 实验步骤

①BrdU标记：

将BrdU添加到细胞培养基中，让细胞在S期摄取BrdU；

②细胞固定和透化：

固定细胞并使其透化，以便抗体进入细胞内；

③BrdU检测：

使用抗BrdU抗体进行免疫荧光或酶联免疫吸附试验（ELISA）检测；

④数据分析：

分析标记了BrdU的细胞比例，以确定S期的细胞比例。

3. EdU标记法

1. 实验原理

与BrdU类似，5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶（5-ethynyl-2’-deoxyuridine, EdU）也可以被细胞在S期摄取并整合到DNA中。EdU的检测通常使用点击化学（Click Chemistry）进行，具有更高的特异性和灵敏度。

2. 实验步骤

①EdU标记：

将EdU添加到细胞培养基中，细胞在S期摄取EdU；

②细胞固定和透化：

固定细胞并使其透化；

③EdU检测：

使用点击化学反应和荧光标记的探针检测EdU；

④数据分析：

通过荧光显微镜或流式细胞术分析标记了EdU的细胞。

注意事项

1. 细胞同步化：在某些情况下，可能需要对细胞进行同步化处理，以确保大多数细胞处于特定的细胞周期阶段；

2. 对照实验：设置未标记的细胞作为阴性对照，以确保检测的特异性；

3. 重复实验：为了确保结果的可靠性，每个实验条件应至少重复三次。

提供信息

1. 细胞类型，客户是否提供细胞；

2. 是否提供PI试剂；

3. 细胞处理条件。

测试价格

1. 细胞株 400/株，贴壁细胞80元培养至6孔细胞量，悬浮细胞100元培养至6孔细胞量；客户提供300/株适应性培养1-2周；

2. 药物处理费用一个药物150，载体转染费用一个载体60；

3. 细胞周期费用100细胞/重复，建议三重复。