细胞迁移实验是用于研究细胞在空间中移动行为的实验方法,这对于了解多种生物学过程,如胚胎发育、伤口愈合、炎症反应、肿瘤侵袭和转移等至关重要,其在药物开发和疾病机理研究中有着重要的应用,特别是在寻找抑制肿瘤侵袭和转移的药物靶点方面。
1. 划痕愈合实验(Scratch Assay)
①在细胞培养皿中培养单层细胞至汇合。
②使用移液器吸头或无菌刀片在细胞层上划出一道划痕。
③洗去划痕中的细胞碎片,添加新鲜培养基。
④在特定时间点拍摄划痕区域的图片。
⑤通过对比不同时间点的图片,分析细胞迁移进入划痕区域的情况。
2. 布鲁斯通小室实验(Boyden Chamber Assay,也称为Transwell Assay)
①将细胞悬浮液置于Transwell小室的上室。
②将含有趋化因子的培养基置于下室。
③细胞在趋化因子的作用下迁移穿过膜。
④经过一定时间后,取出膜,固定并染色迁移到下室的细胞。
⑤计数迁移到膜下表面的细胞数量。
3. 基质胶侵袭实验(Matrigel Invasion Assay)
①在Transwell小室的膜上铺上一层基质胶,模拟基底膜。
②将细胞悬浮液置于上室,下室加入含有趋化因子的培养基。
③细胞需要侵袭穿过基质胶才能到达下室。
④经过一段时间后,固定、染色并计数侵袭到膜下表面的细胞。
1. 细胞类型和状态:选择适合进行迁移实验的细胞类型,并确保细胞处于良好的生长状态;
2. 实验重复性:进行足够的重复实验以确保结果的可靠性;
3. 时间点选择:选择合适的时间点进行观察,以捕捉细胞迁移的不同阶段;
4. 对照组设置:设置适当的对照组(如未处理的细胞或使用抑制剂处理的细胞)以比较和分析结果;
5. 数据分析:使用适当的统计方法分析实验结果。
1. 细胞类型,客户是否提供细胞;
2. 检测时间;
3. 是否需要进行药物处理或敲除过表达处理,敲除或过表达处理是否提供相关载体;
4. 客户是否确认细胞可以进行划痕处理。
1. 细胞株 400/株,贴壁细胞80元培养至6孔细胞量,悬浮细胞100元培养至6孔细胞量;客户提供300/株适应性培养1-2周;
2. 药物处理费用一个药物150,载体转染费用一个载体60;
3. 划痕费用100/细胞/处理。