细胞凋亡检测是用于确定细胞是否正在经历程序性细胞死亡(凋亡)的实验方法。细胞凋亡是一种受控的细胞死亡过程,对于多细胞生物体的正常发育、组织重塑和疾病状态都至关重要,在研究癌症、神经退行性疾病、免疫疾病等领域有着广泛的应用,对于理解疾病机制和开发新的治疗方法具有重要意义。
1. 形态学检测
光学显微镜观察:凋亡细胞通常表现为细胞体积缩小、染色质凝聚、核碎裂和形成凋亡小体;
透射电子显微镜:可以观察到凋亡细胞的超微结构变化,如核膜和细胞器膜完整性的丧失;
2. 细胞膜完整性检测
Annexin V染色:凋亡细胞会暴露磷脂酰丝氨酸(PS)于细胞膜外侧,Annexin V与PS结合后,可以通过荧光标记进行检测;
碘化丙啶(PI)染色:与Annexin V结合使用,PI可以穿透破损的细胞膜,标记死细胞;
3. DNA片段化检测
DNA ladder电泳:凋亡细胞会经历DNA的有控降解,产生特征性的DNA片段,通过电泳可以观察到梯状条带;
原位末端标记(TUNEL)法:标记DNA断裂末端,通过荧光或酶标检测;
4. Caspase活性检测
Caspase活性试剂盒:Caspase是一组蛋白酶,它们在凋亡过程中被激活,可以通过特定的底物来检测它们的活性;
5. 免疫组化/免疫荧光检测
Bcl-2家族蛋白检测:Bcl-2家族蛋白在凋亡调控中起关键作用,可以通过免疫组化或免疫荧光方法检测其表达水平。
1. 细胞培养:在适当的条件下培养细胞;
2. 诱导凋亡(如果需要):通过药物、辐射、基因沉默等方法诱导细胞凋亡;
3. 细胞收集:根据不同的检测方法,可能需要离心收集细胞或直接在培养皿中进行检测;
4. 样本处理:根据所选检测方法,进行细胞固定、染色、裂解等步骤;
5. 检测:使用显微镜、流式细胞仪、酶标仪等仪器进行检测;
6. 数据分析:根据检测到的信号强度或形态特征进行分析。
1. 确保实验中使用适当的阳性对照和阴性对照;
2. 避免细胞损伤导致假阳性结果,特别是在处理细胞时;
3. 考虑到不同的检测方法可能具有不同的特异性和敏感性,选择合适的方法至关重要。
1. 细胞类型,客户是否提供细胞;
2. 客户是否提供凋亡检测试剂盒;
3. 若客户不提供细胞,细胞培养需要什么条件,是否需要进行处理;
4. 若客户提供细胞,能否接受运输过程中造成的机械性凋亡损伤;
5. 对凋亡图片分析或流式细胞仪是否有需求。
1. 细胞株 400/株,贴壁细胞80元培养至6孔细胞量,悬浮细胞100元培养至6孔细胞量;客户提供300/株适应性培养1-2周;
2. 药物处理费用一个药物150,载体转染费用一个载体60;
3. 细胞凋亡费用150细胞/重复,建议三重复。