破骨细胞是骨骼重塑过程中负责骨吸收的关键细胞。破骨实验是用来评估破骨细胞的活性、功能以及相关调控机制的实验,在研究骨骼疾病的发病机制和新药开发中起着重要作用,通过对破骨细胞功能的深入了解,可以更好地理解骨骼疾病的病理过程并寻找治疗策略。
1. 研究破骨细胞的形成和活化;
2. 评估药物或化合物对破骨细胞活性的影响;
3. 探索骨骼疾病如骨质疏松症、骨硬化症等的病理机制。
1. 骨片培养实验:
a. 将小鼠或其他动物的长骨切片放入培养皿中;
b. 加入含有破骨细胞前体细胞的培养基;
c. 培养一定时间后,观察骨片上破骨细胞的形成和骨吸收情况。
2. 体外破骨细胞生成实验:
a. 从骨髓或血液中分离破骨细胞前体细胞;
b. 在含有特定生长因子(如巨噬细胞集落刺激因子M-CSF和破骨细胞分化因子RANKL)的培养基中培养,诱导破骨细胞分化;
c. 通过显微镜观察细胞形态和功能的变化。
3. TRAP染色:
a. 破骨细胞富含酸性磷酸酶,TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)染色可以特异性地标记破骨细胞;
b. 通过TRAP染色,可以定量分析破骨细胞的数量和活性。
4. 骨吸收功能测试:
a. 使用放射性标记的钙或荧光标记的骨基质蛋白来评估破骨细胞对骨基质的吸收能力。
1. 骨片准备:将骨片消毒并放入培养皿中;
2. 细胞接种:将破骨细胞前体细胞接种到骨片上;
3. 培养:在含有必要生长因子的培养基中培养;
4. 观察:定期在显微镜下观察破骨细胞的形成和骨吸收情况;
5. 染色与定量分析:使用TRAP染色或其他染色方法,然后进行定量分析。
1. 确保细胞和骨片的兼容性;
2. 控制实验条件,如细胞密度、培养基成分、生长因子浓度等;
3. 进行阴性对照和阳性对照实验,以确保实验结果的可靠性。
1. 客户是否提供细胞,提供的话建议提供Raw264.7细胞或破骨前体细胞;
2. 是否提供破骨诱导因子或破骨诱导液;
3. 破骨完成后破骨孔板是否需要退还给客户;
4. 是否需要进行药物处理。
1. Raw264.7细胞或破骨前体细胞400元;
2. 破骨培养200/天,一般培养5-7天;
3. 药物处理费用一个药物150,载体转染费用一个载体60;
4. TRAP染色150/样。