免疫荧光（Immunofluorescence）是一种利用荧光标记的抗体来检测特定抗原的实验技术。这种技术可以在细胞、组织切片或其他生物样本中定位特定的蛋白质或其他分子。免疫荧光技术因其灵敏度高、特异性强、操作简便和能够实现多重标记等优点，在生物学和医学研究中得到了广泛应用。

1. 样本制备：

细胞：将细胞培养在载玻片或培养皿中，然后在适当的时候进行固定（通常使用多聚甲醛）和透化（使用透化剂如Triton X-100）。

组织切片：将组织冷冻切片或石蜡切片固定在载玻片上，然后进行脱蜡和透化。

2. 封闭：为了减少非特异性结合，通常会用含有血清或脱脂奶粉的封闭剂处理样本。

3. 一抗孵育：将针对目标抗原的特异性一抗（通常是初级抗体）加到样本上，并在适当的条件下孵育（通常在湿盒中过夜）。

4. 清洗：用缓冲液清洗样本，以去除未结合的初级抗体。

5. 二抗孵育：加入荧光标记的二抗（通常是针对初级抗体的种属特异性抗体），在适当条件下孵育。

6. 清洗：再次清洗样本，去除未结合的二抗。

7. 封片：使用含有抗淬灭剂的封片剂（如含DAPI的甘油或PVA）封片。

8. 荧光显微镜观察：在荧光显微镜下观察样本，并使用适当的滤光片来激发荧光染料。

9. 图像获取和分析：通过显微镜摄像头获取荧光图像，并使用图像分析软件进行定量分析。

免疫荧光实验中常用的荧光染料包括FITC（绿色）、TRITC（红色）、Cy3（红色）、Cy5（远红色）、Alexa Fluor系列、PE（藻红蛋白）等。

1. 细胞和组织的形态学分析；

2. 蛋白质定位和表达水平的检测；

3. 细胞内信号传导途径的研究；

4. 病理组织的诊断。

1. 确保抗体与样本种属的兼容性；

2. 避免荧光淬灭，使用适当的封片剂和抗淬灭剂；

3. 控制实验条件，如抗体浓度、孵育时间和温度；

4. 进行适当的对照实验，如仅加二抗的阴性对照和已知阳性样本的阳性对照；

1. 细胞类型，客户是否提供细胞；

2. 客户是否提供抗体；

3. 拍照的时候需要共聚焦显微镜拍照还是普通荧光显微镜拍照。

1. 细胞株 400/株，贴壁细胞80元培养至6孔细胞量，悬浮细胞100元培养至6孔细胞量；客户提供300/株适应性培养1-2周；

2. 药物处理费用一个药物150，载体转染费用一个载体60；

3. 细胞爬片30元/片；

4. 普通免疫荧光单标检测 40元/片，普通免疫荧光双标检测 60元/片，抗体购买费用另算；

5. 荧光分析 20/套。